Tol2の転移の研究：Drosophila中での転移と最小必須cis領域の解析

浦崎明宏、Ghislaine Morvan、上田龍、川上浩一

国立遺伝学研究所

　Tol2 は、 hAT ファミリーに属するメダカ由来のトランスポゾンである。 Tol2 は脊椎動物細胞中において高頻度で転移することを明らかにしてきた。しかし、無脊椎動物においては転移するか否かは不明であった。 Tol2 が無脊椎動物細胞中で切り出されるか否かを調べるために、トランスポゾンドナープラスミドと転移酵素mRNAを Drosophila の胚に微量注入した。微量注入した胚からDNAを回収し、PCRにより Tol2 の切り出し活性を調べた。転移酵素mRNAの存在下ではTol2は切り出されることが分かった。さらに、 Tol2 が Drosophila ゲノム中に転移するか否かを調べるために、レポーター遺伝子を持つ Tol2 トランスポゾンを構築した。このトランスポゾンベクターと転移酵素mRNAを Drosophila の胚に微量注入した。微量注入した胚の次世代から、ゲノム中にトランスポゾンが組み込まれたハエを高頻度で見いだした。 Drosophila において広く使われている P element は、遺伝子の5’側に挿入しやすいという傾向があるが、 Tol2 ではそのような傾向はない。よって、 Tol2 は P element とは異なる特性をもつ新しい遺伝子解析ツールとして利用できる。また、 Tol2 の転移に必要な cis 領域の解析を行い、 Tol2 の転移には Tol2 の5’側の200 bpと3’側の150 bp が必要であることが明らかになった。このことは、 Tol2 のコンパクトなベクターの作成が可能であることを示している。また、メダカの Tol2 が Drosophila 中で転移したことから、 Tol2 の転移にはトランスポゼース以外の宿主因子を必要としないと考えられる。このことは、 Tol2 が他の無脊椎動物における遺伝子タギングのツールとしての可能性を持っていることを示している。